甘油檢測試劑盒液體，組織樣本都可以檢測
描述：甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測指標(biāo)，但檢測更方便。本試劑盒采用甘油氧化酶法和經(jīng)典GPO-Trinder酶學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法，通過比色法測定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過優(yōu)化后，操作步驟更加簡單，可靠性和重復(fù)性俱佳，適合生物醫(yī)學(xué)、食品實(shí)驗(yàn)室檢測。
原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶化為3-甘油，再被甘油氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。
適用范圍：測定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。
組成 ：
R1試劑 40 ml
R2試劑 10 ml
4 mmol/L甘油標(biāo)準(zhǔn)品1 ml
4 ºC，儲存3個(gè)月。
一所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計(jì)。工作波長550nm，如無此波長建議優(yōu)先選用570nm、次選530、490nm。
二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合，立即使用或4ºC保存<1天，變色棄去。
三 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將4 mM甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設(shè)置0濃度對照反應(yīng)管。
四 甘油濃度測定：
參見下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致，減小實(shí)驗(yàn)誤差，可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當(dāng)甘油濃度較低時(shí)，可將待測樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合，然后再進(jìn)行測定，但是如果樣品體積超過100µl時(shí)將會稀釋工作液中酶的濃度，使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計(jì)算樣品中甘油濃度。）
37ºC或25ºC反應(yīng) 10分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。
先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測定各管OD值。
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。
附Excel作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管OD值為y軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為x軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊做圖向?qū)?，選擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn)，點(diǎn)擊-添加趨勢線-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2值-。
說明：
1、維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。
2、正常血清甘油濃度為20-130µmol/L，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)須用不含酚紅的無色無血清培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中含有酚紅，可以選擇含有酚紅的無細(xì)胞培養(yǎng)基作為對照進(jìn)行測定
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